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產品介紹：HepSFM1培養基是專門針對肝臟細胞體外培養的無血清培養基，適合肝臟細胞貼壁培養，包含氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素和生長因子等，含有L-谷氨酰胺，一般無需額外添加。經測試，多種肝臟細胞可以在該培養基中生長，本品不含抗生素。
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
| HepSFM1肝細胞培養基 | SH001 | 500mL | 1420.00 |
或發送郵件至：jiahang.hu@sdelad.com
應用范圍：適用于科研和基于細胞培養的大規模生物制品的生產，不可直接作為藥物使用。
儲運方法及效期：儲存：2-8℃冷藏；運輸：常溫；有效期：12個月。
培養條件：37℃，5% CO2濕潤培養條件。
注意：請使用正確的無菌操作技術，最好在II級A2型生物安全柜中操作。
細胞復蘇
1.準備一個37℃水浴。
2.從液氮儲存罐中取出裝有冷凍細胞的凍存管，并立即將其放入37℃的水浴中。
3.在37℃水浴中輕輕旋轉凍存管，快速解凍細胞（<1分鐘），直至管中只剩下少量冰。
4.將凍存管轉移到生物安全柜中。打開前，使用70%乙醇小心擦拭凍存管外部。
5.打開管蓋，小心將解凍的細胞轉移到已經加有5ml培養液的15ml尖底離心管中。
6.200×g離心5-10分鐘收集細胞。實際離心速度和持續時間因細胞類型而異。
6.離心后，檢查上清液的澄清度和完整團塊的可見性。在不干擾細胞團塊的情況下，無菌吸掉上清液。
7.加入1ml的新鮮培養液，輕輕地將細胞重懸于培養基中，然后將其轉移到適當的培養瓶中，置于二氧化碳培養箱中培養。
細胞傳代
1.從二氧化碳培養箱中取出長滿細胞的培養瓶，吸掉陳舊的細胞培養液。
2.在生物安全柜中，使用不含鈣和鎂的平衡鹽溶液（DPBS，D-Hanks）洗滌細胞（每10cm2培養表面積需約2 mL）。向培養瓶附著細胞層的對側緩慢添加平衡鹽溶液，以避免干擾細胞層，并來回搖動數次培養瓶。
3.無菌條件下，吸掉平衡鹽溶液。
4.向培養瓶一側添加預熱的胰酶溶液；使用足夠的試劑覆蓋細胞層（每10cm2約需0.5 mL）。輕輕搖動容器以完全覆蓋細胞層。
5.將培養瓶在室溫下胰酶消化約2分鐘。請注意，實際胰酶消化時間隨細胞系不同而異。
6.不時在顯微鏡下觀察細胞是否解離。如果細胞脫離不到90%，則繼續孵育，每隔30秒檢查解離狀況。輕輕搖晃培養瓶可加速細胞解離。
7.當90%的細胞已解離時，添加2倍體積（解離試劑體積的兩倍）的預熱完全生長培養基以終止或減弱消化反應。吹吸液體從培養瓶表面吹下細胞。細胞懸液以分散細胞，從細胞層表面分離培養基。
8.將細胞轉移到一個15 mL的尖底離心管中，200×g離心5-10分鐘收集細胞。請注意，離心速度和時間因細胞類型而異。
9.將細胞團塊重懸在最小體積的預熱完全生長培養基中，取出樣品進行計數。
10.使用血細胞計數儀、細胞計數儀、臺盼藍排染法或CountessTM 3自動細胞計數儀，測定細胞總數和活細胞百分比。
11. 將細胞懸浮液用新鮮培養液稀釋至合適密度接種。（推薦按照1-5×104細胞/cm2密度進行接種），然后將傳代好的細胞放回培養箱中。
注意: 如果使用培養瓶，在將其放回培養箱之前，如您使用的不是帶透氣蓋的透氣培養瓶，請先打開瓶蓋，以便進行充分的氣體交換。不建議劇烈搖動培養瓶，因為這可能會損傷細胞。
細胞凍存
1.選擇處于對數生長期的細胞進行凍存。匯合度達到80%左右，細胞活率大于90%。
2.細胞凍存選擇合適的程序降溫冷凍盒(如Nalgene公司的Mr.Frosty梯度程序降溫冷凍盒)。按照操作說明，提前加入適量異丙醇置于2-8℃預冷。
3.小心吸取細胞培養上清到一個新的15ml離心管中，100×g離心10min收集條件培養液，轉移到另一個新的15ml離心管中，用于配制細胞凍存液。
4.配制細胞凍存液：新鮮培養基和條件培養液凍存液等體積混合，然后加入DMSO到終濃度為7.5%。配好的凍存液后置于2-8℃保存。。
4.按照細胞傳代中的方法消化細胞，100×g 離心5-10 min收集細胞，去掉上清，補加細胞凍存液。按照密度計算所需的凍存液體積， 最終的凍存的細胞密度為1-5×106 細胞/mL。
6.將細胞懸浮液等分至低溫凍存管中。輕輕混合細胞以保持細胞懸浮液均勻。
7.將凍存管放到預冷的梯度程序降溫凍存盒中,轉移凍存盒到 -80℃超低溫冰箱中。
8.將裝有細胞的凍存管轉移到液氮罐中保存。